压抑下深层的恐惧

2019-09-22 12:05栏目:娱乐影视
TAG:

景色拍的很模糊很丑,低成本,比较压抑。后部分特效,脑洞还是可以,人形植物以及人与植物基因相融合还是很震撼。基因融合也许和克隆人技术相关,相当压抑,其实理念可能是如果有东西比如科技,医学改变了人的繁衍生息方式,一个细胞就可以复制出你,你在这个世界上是谁?生存和死亡有何意义?只需要留下你的细胞基因就可以克隆出无数个你,细思极恐。估计拍摄成本不高,很多特效比较难看,景色模糊,偶尔还来十几秒床戏,比较尬,跟整部电影没有很大关系,就为了床戏而床戏。时间不停在倒叙,在过去和现在切换。比较烧脑压抑,难懂。

核心提示: 高等植物在其生命活动过程中,由于基因的选择性表达,决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和

© 本文版权归作者  珍贵  所有,任何形式转载请联系作者。

高等植物在其生命活动过程中,由于基因的选择性表达,决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中,都有不同的基因起作用。因此,研究基因的选择性表达,掌握其对植物生命活动的调控,克隆新基因,是分子生物学的重要课题。

澳门皇冠844网站,1992年,Liang和Pardee[1]首次提出差异显示技术,并且利用这一技术克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRMA的优点[2],很快成为克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具。这项技术最初用于医学研究上,近年来已开始在高等植物研究中应用,为研究高等植物的发育、生理代谢、基因表达提供了重要的技术手段。

1 差异显示技术的原理和实验程序 差异显示的基本原理是,利用一系列的oligo引物,逆转录真核生物细胞中全部表达的mRMA,通过PCR扩增的方法,转换成cRMA双链,再利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,将有差异的片段分开,筛选出目的基因。其技术一般包括下列步骤:从植物组织中提取总RMA,在这个步骤中注意不能有RMA污染,一般用无RMA酶的RMA酶在37℃下处理30 min;在逆转录酶作用下,以Oligo T11MN 为引物,进行逆转录;PCR反应,扩增cRMA的第一条链;扩增后的cRMA进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,使差异表达的cRMA片段在6%测序胶上分开;找出不同处理间差异显示的条带,从胶上切割下来,并回收,再进行第二次扩增;克隆差异片段,差异片段可作为探针;Northern 杂交,验证目的片段,去掉假阳性片段;对目的片段进行测序;以克隆的目的片段为探针,从基因组文库中筛选出相应的全长基因。

2 差异显示技术的应用 差异显示技术由于充分利用PCR技术和反转录,因此比较快速,且利用该技术能够观察细胞中mRMA的组成,了解植物不同发育阶段或不同环境条件下的细胞之间的差异表达,克隆目的基因。此项技术常用于下列领域。

2.1 基因表达 Vielle-Calzada[3]和Nuccio利用差异显示技术研究了狼尾草的基因表达情况,发现狼尾草的有性生殖和无融合生殖的子房在基因表达上不同。用2个锚定引物和20个10碱基的随机引物,共显示出2268个cRMA片段。其中有3个基因片段能在有性生殖的子房中特异表达,表明无融合生殖子房可能缺少某些基因,而表现无融合生殖。Brigham等[4]研究碗豆根尖和界面细胞的mRMA和蛋白质的差异表达后指出,两种细胞的mRMA差异与蛋白质差异具有高度的相似性,界面细胞的分化与蛋白表达的变化有关。利用差异显示技术可以揭示植物根的形态建成。Bachem等[5]利用差异显示技术,揭示了马铃薯块茎在不同发育阶段的基因表达情况,并同时比较了马铃薯块茎不同发育时期的mRMA表达情况,认为在块茎形成过程中有2个lox基因,不同时期产生的mRMA数量不同。Opsahl等[6]发现,玉米胚特定区域才能表达的基因——ZmEsr,在开花前4~7d内表达,之后表达量逐渐减少。张立平等[7]比较了水稻对铝敏感品种和抗性品种,在铝胁迫条件下,苗期抗性品种和敏感品种基因表达有明显差异。

2.2 基因的鉴定与克隆 差异显示技术目前已成为鉴定和克隆基因的重要方法。Hannappel等[8]利用一对近等基因系,研究了西红柿基因组特异区。这对近等基因系中有一个含有抗烟草花叶病毒抗性基因Tm-2a,一个不含。这两个近等基因系有一个差异片段,克隆后经Northern杂交证实是阳性克隆,并且发现,这个片段与抗性有密切关系。Joshi[9]利用修饰的差异显示法克隆了小麦HSP70基因族的3个公认的基因,他认为差异显示法在很短时间内就可以克隆基因。Knaap和Kende[10]克隆了水稻的赤霉素调控基因,利用赤霉素处理水稻,一个诱导,一个不诱导,发现二者在差异显示时,mRMA表达量相差10倍,因而很容易克隆了一个赤霉素调控基因。Sharma和Davis[11]利用差异显示法,分析了拟南芥对臭氧的反应。拟南芥用臭氧处理后,在根和成熟花中,臭氧诱导的转录物AtOZI 1 mRMA含量极高,是叶的3~5倍。序列分析证明,AtOZI 1编码一个Mr8600蛋白多肽,其序列与已知的蛋白序列基本一致,充分表明差异显示方法是克隆基因的有效方法。赵大中等[12]比较春化过和不春化的小麦,发现春化20d的小麦有一个与春化相关的cRMA克隆,经Northern杂交和同源性分析,证明VRC54是春化特异克隆片段,该克隆片段的基因对春化需求型植物的成花诱导起重要作用.2.3 研究激素对植物发育的影响 在植物的发育过程中,激素自始至终起着作用,调控着植物的器官形成、生长发育。研究其作用具有重要意义。Peters等[13]发现,用玉米素处理红叶藜的细胞时,mRMA表达量迅速增加,从而使细胞分裂加快。Chen等[14]发现,用赤霉素处理水稻幼苗,然后采用mRMA差异显示技术,处理过的幼苗中mRMA有特异的差异带。克隆此片段,发现此片段影响基因调控过程中的某些蛋白。瞬时表达分析表明,该序列位于启动子转录起始位点上游231~159碱基位置;另外,还发现UBC gene可促进α-淀粉酶基因表达,从而调节水稻幼苗发育。

2.4 研究植物发育过程 果实成熟是一个复杂的过程,在这个过程中,基因表达和细胞代谢有一些特殊的变化,其中乙烯对果实成熟有重要影响。为了了解果实成熟的分子机理,Wilkinson等[15]利用差异显示技术分析了果实的发育,发现成熟的草莓与不成熟的草莓之间有较多的差异,有3个特异表达的mRMA片段与果实发育有密切的关系,cRMA片段序列推测的氨基酸序列与已知的蛋白有同源关系。作者认为,差异显示技术能在RMA水平上研究植物果实成熟和其它发育过程。Callard等[16]通过研究拟南芥细胞悬浮培养后期的mRMA差异表达,分析了器官衰老的原因。他们发现,有3个基因的转录产物mRMA在器官衰老时大量积累,这3个基因转录翻译产生的蛋白酶对衰老器官发育有重要作用。如果改变这3个基因,则有利于延缓器官衰老。Heck等[17]研究了欧洲油菜的胚发育,认为有一个重要的基因Ag115调控胚发育过程。Northern杂交和原位杂交证明,Ag115产生的mRMA和蛋白早在胚的球形期就开始大量积累,随后这些蛋白影响着胚的发育进程。

版权声明:本文由澳门皇冠844网站发布于娱乐影视,转载请注明出处:压抑下深层的恐惧